微头条丨硫酸铵沉淀操作步骤是什么？硫酸铵沉淀应用提示

硫酸铵沉淀操作步骤是什么?

配制饱和硫酸铵溶液：( SAS ) 1.将 767g ( NH 4 ) 2 SO 4 边搅拌边慢慢加到 1 升 蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。此即饱和度为 100% 的硫酸铵溶液( 4.1 mol/L, 25 ° C ). 2.其它不同饱和度铵溶液的配制

沉淀：1.样品(如腹水) 20 000 ′ g 离心 30 min ，除去细胞碎片; 2.保留上清液并测量体积; 3.边搅拌边慢慢加入等体积的 SAS 到上清液中，终浓度为 1 ： 1 ( 4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时或搅拌过夜( 4 ° C )，使蛋白质充分沉淀

透析：1.蛋白质溶液 10 000 ′ g 离心 30 min ( 4 ° C )。弃上清保留沉淀; 2.将沉淀溶于少量( 10-20ml ) PBS -0.2g /L 叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对 PBS -0.2g /L 叠氮钠透析 24-48 小时( 4 ° C )，每隔 3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨; 3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。

硫酸铵沉淀应用提示：

(一) 先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。 1.边搅拌边慢慢加 SAS 到样品溶液中，使浓度为 0.5:1 (v/v) ; 2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时 或过夜( 4 ° C );3.3000 ′ g 离心 30 min ( 4 ° C )，保留上清液;上清液再加 SAS 到 0.5:1(v/v) ，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于 PBS ，同前透析，除去硫酸氨; 4.上清液再加 SAS 到 0.5:1 (v/v) ，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于 PBS ，同前透析，除去硫酸氨; 5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效

(二)为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析(硫酸氨用量参考表 1 );硫酸氨沉淀法与层析 技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。

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